摘要

近年來(lái)國家出臺系列相關(guān)政策支持傳統中醫的創(chuàng )新和發(fā)展，將中醫藥發(fā)展列入國家發(fā)展戰略，中醫藥將對社會(huì )發(fā)展做出更大貢獻。在2016年印發(fā)的《中醫藥發(fā)展戰略規劃綱要（2016—2030年）》中提出，到2020年，實(shí)現人人基本享有中醫藥服務(wù)，中醫藥產(chǎn)業(yè)成為國民經(jīng)濟重要支柱之一；到2030年，中醫藥服務(wù)領(lǐng)域實(shí)現全覆蓋，中醫藥健康服務(wù)能力顯著(zhù)增強，對社會(huì )經(jīng)濟發(fā)展作出更大貢獻，傳統中醫的創(chuàng )新發(fā)展將迎來(lái)高光時(shí)刻。而作為中醫藥中重要的組成部分——中藥也成為了人們關(guān)注的焦點(diǎn)，中藥中農藥的殘留量的檢測和限定也成為了中藥使用過(guò)程中的一個(gè)重要環(huán)節。作為我們日常常見(jiàn)及廣泛使用的中藥中的一類(lèi)，枸杞子中農藥殘留的檢測也成為使用和食用枸杞子的一個(gè)必要環(huán)節。

近年來(lái)，隨著(zhù)國內外對農藥殘留相關(guān)標準的日益完善、監管力度的不斷加強、責任主體安全意識的持續提高，農藥殘留檢測技術(shù)得到快速發(fā)展，萊伯泰科可以提供智能化、一體化的農殘前處理解決方案。

本文參考《GB 23200.11-2016 食品安全國家標準 桑枝、金銀花、枸杞子和荷葉中413種農藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜法》提供枸杞子中部分農藥殘留的測定方案。

1、儀器設備及試劑耗材

1.1儀器設備

SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統，萊伯泰科

MVP全自動(dòng)高通量真空平行濃縮儀，萊伯泰科

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)  AB4500

全自動(dòng)均質(zhì)儀MH-400，萊伯泰科

MiniLab 3000全自動(dòng)液體處理平臺，萊伯泰科

M64高通量平行濃縮儀，萊伯泰科

1.2標準品

19種農藥混標農殘標準儲備液：100μg/mL

19種農藥混標農殘標準工作液：取100μL的標準儲備液于10mL的容量瓶中，用乙腈定容，得到濃度為1μg/mL的標準工作液。

2、實(shí)驗過(guò)程

2.1提取

稱(chēng)取樣品枸杞子1.0g（精確至0.01g），置于50mL離心管中，加入5mL水，15mL乙腈，15000r/min均質(zhì)提取1min，加入2g氯化鈉，再均質(zhì)提取1min，取上清液于40mL帶尾管濃縮杯中，在離心管中加入15mL乙腈，重復均質(zhì)提取1min，8000r/min離心5min,取全部上清液與之前的上清液合并。于溫度40℃，轉數200r/min，梯度壓力500mbar/1min-300mbar/2min-220mbar/5min-200mbar/5min-180mbar/15min條件下減壓真空濃縮至1~2mL，用4mL乙腈-甲苯（3+1）沖洗濃縮杯壁，并重復1次，待凈化。

加標樣品，于稱(chēng)樣完成時(shí)加入1μg/mL的標準工作液100μL，提取步驟同上。

2.2 SPE凈化

在TPH柱中加入2cm高無(wú)水硫酸鈉，按照圖1所示進(jìn)行SPE1000方法編輯，加載并運行方法，完成2.1中所有樣品的萃取凈化。

收集洗脫液于60mL收集瓶中，于溫度40℃、轉數180r/min、梯度壓力500mbr/1min-300mbar/2min-200mbar/3min-180mbar/10min-150mbar/10min-100mabr/30min條件下減壓真空濃縮近干，并于溫度40℃、壓力3psi條件下經(jīng)M64氮吹至干，加入1mL乙腈，混勻。0.22μm濾膜過(guò)濾，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

圖1  固相萃取方法

2.3液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

A）色譜柱：C18，柱長(cháng)100mm，內徑2.1mm，粒徑2.7μm

B）流動(dòng)相：0.1%甲酸水：乙腈，梯度見(jiàn)表1.

C）柱溫：40℃

D）進(jìn)樣量：10μL

E）離子源：ESI

F）掃描方式：正離子掃描

G）檢測方式：多反應監測

H）離子噴霧電壓：5500

表一液相梯度表

2.4標準曲線(xiàn)配置

標準曲線(xiàn)使用MiniLab 3000 全自動(dòng)液體處理平臺配置，具體步驟見(jiàn)圖2。

圖2標準曲線(xiàn)配置步驟

3、實(shí)驗結果

3.1標準曲線(xiàn)總離子色譜圖

圖3 標準曲線(xiàn)色譜圖

3.2基質(zhì)空白離子色譜圖

圖4 基質(zhì)空白色譜圖

3.3加標樣品離子色譜圖

圖5 加標樣品色譜圖

3.4各目標物曲線(xiàn)線(xiàn)性

圖6 標準曲線(xiàn)圖

3.5 加標回收結果

表2 加標回收率結果

4.結果與討論

本方法使用SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統對枸杞子中甲拌磷、毒死蜱、克百威等19種農藥進(jìn)行萃取，經(jīng)MVP減壓濃縮后用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜/質(zhì)譜器進(jìn)行檢測，加標回收率范圍在65.0%-104.7%，RSD為2.21%-9.54%，方法的加標回收率滿(mǎn)足要求，適合枸杞子中甲拌磷、毒死蜱、克百威等農藥殘留的檢測。

此次實(shí)驗使用了MH-400、MVP、SPE1000、M64及MiniLab3000整體解決方案，全過(guò)程高度自動(dòng)化、批量化，減少實(shí)驗中提取試劑的轉移，提高實(shí)驗效率、節省了實(shí)驗人員的時(shí)間，儀器封閉及主動(dòng)排廢的功能減少了實(shí)驗室和環(huán)境的污染，保護實(shí)驗人員安全。

參考標準

GB 23200.11-2016 食品安全國家標準 桑枝、金銀花、枸杞子和荷葉中413種農藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜法